| 摘 要： | 目的：构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR)及靶向上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule, EPCAM)嵌合抗原共刺激受体(chimeric antigen costimulatory receptor, CCR)共修饰的T细胞，并对其进行体外活性评估。方法：将EPCAM-CCR和GPC3-CAR基因片段克隆入慢病毒载体质粒，酶切、PCR和测序鉴定CCR+CAR pCDH重组载体。分离、激活和扩增人T细胞，利用慢病毒感染并筛选能够稳定表达该组合型嵌合抗原受体人T细胞。通过Western blot、流式细胞术(flow cytometry, FCM)验证CCR+CAR T细胞中CCR+CAR的表达，ELISA检测细胞因子IL-2、INF-γ、IL-4的分泌。结果：成功构建CCR+CAR pCDH慢病毒重组载体。成功分离、激活并扩增人T细胞。CCR+CAR pCDH慢病毒成功感染人T细胞，RT-PCR、Western blot检测也显示其成功表...
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