| 摘 要： | 目的：烟草酰基糖酰基转移酶(Nicotiana tabacum acylsugar acyltransferase, NtASAT1)可催化短支链脂肪酸与蔗糖形成蔗糖单酯。利用大肠杆菌原核表达系统分析NtASAT1的表达，并对其进行纯化及功能验证。方法：首先利用生物信息学软件对烟草NtASAT1的理化性质、二级结构及同源性进行分析；之后从烟草腺毛的cDNA中克隆NtASAT1基因，并构建表达载体，研究其在BL21(DE3)中的表达情况；最后利用镍柱对NtASAT1进行纯化，将纯化后得到的目标蛋白进行酶反应，通过液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS)检测产物并验证其功能活性。结果：C端截短93个氨基酸之后的NtASAT1能够在BL21(DE3)中表达。表达后的蛋白质大部分以不可溶状态存在于细胞中，不同的诱导剂浓度、诱导时间及诱导温度对于蛋白质可溶性表达影响不明显。利用镍柱对其纯化得到目标蛋白，加入底物进行酶反应，通过LC-MS检测到产物蔗糖单酯的存在。结论：通过克隆及纯化得到重组蛋白trNtASAT1,加入底物进行...
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