| 牛绝对端粒长度测定及DNA提取造成的影响 |
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| 引用本文： | 鲍莉雯,蔡勤,周一叶,许淼,舒娟,李华,李虹雨,曾溢滔,曾凡一.牛绝对端粒长度测定及DNA提取造成的影响[J].中国生物工程杂志,2023(8):63-71. |
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| 作者姓名： | 鲍莉雯 蔡勤 周一叶 许淼 舒娟 李华 李虹雨 曾溢滔 曾凡一 |
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| 作者单位： | 1. 上海市儿童医院上海交通大学医学院附属儿童医院上海医学遗传研究所;2. 上海交通大学基础医学院组织胚胎学与遗传发育学系;3. 卫生部医学分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划（2019YFA0801402）；;国家自然科学基金（31871484、82271890）资助项目； |
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| 摘 要： | 目的：端粒是真核生物染色体末端的一种高度保守的负责维持染色体稳定的特殊结构，其DNA序列长度即端粒长度，会随着年龄增长或疾病发生发展而逐渐缩短，检测端粒长度可以为评估机体衰老和健康状况提供参考，但目前缺乏测定微量牛DNA样本绝对端粒长度的方法；通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)实现微量牛DNA样本绝对端粒长度的测定并评估DNA提取方法对牛绝对端粒长度测定结果的影响，为进行端粒长度研究时选择合适的DNA提取方法和端粒长度分析方法提供参考。方法：利用标准曲线对检测样本的端粒和内参Ct值进行转换，通过qPCR测定牛端粒长度绝对值；采用膜吸附法、苯酚-氯仿法和磁珠法3种方法分别提取相同样本的DNA,分别用端粒末端限制性片段(terminal restriction fragment, TRF)分析法和qPCR法分析端粒长度，比较不同DNA提取方法对牛绝对端粒长度测定的影响。结果：(1)qPCR可以测定纳克级别DNA样本的绝对端粒长度，检测结果重复性良好，并且和“金标准”TRF测定结果的相关性良好。(2)不同方法提取的DNA用TRF分析法和...
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| 关 键 词： | 端粒长度 qPCR TRF DNA提取方法 |
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