| pBR322-Red介导的E.coli染色体基因敲入、位点及表达研究 |
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| 引用本文： | 陈伟,李山虎,于梅,王鸣刚,周建光. pBR322-Red介导的E.coli染色体基因敲入、位点及表达研究[J]. 遗传, 2006, 28(1) |
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| 作者姓名： | 陈伟 李山虎 于梅 王鸣刚 周建光 |
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| 摘 要： | 应用pBR322-Red介导的重组工程系统,kan/sacB选择反选择系统,双链线性DNA重组技术和重叠引物介导的DNA重组技术,将长度为1 653 bp的luc报告基因分别敲入到E.coli W3110染色体lacZ,lacY和lacA基因的位置,建立了一系列具有新遗传表型的菌株:CWL2、CWL4和CWL6.荧光素酶分析表明,外源报告基因luc能在这3个结构基因处有效的组成型表达.为了进一步确定外源基因的表达情况,用霍乱毒素B亚单位基因ctxb替换了lacZ基因,构建了新菌株CWD1.证明了以单拷贝形式存在在大肠杆菌染色体CWD1上的ctxb基因能有效的表达CTB蛋白并能将其分泌至细胞外培养液中.结果初步确定了大肠杆菌染色体上的lac操纵子结构基因位点适合外源基因的敲入和表达.
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| 关 键 词： | 重组工程 基因敲入 霍乱毒素B亚单位 |
pBR322-Red Mediated Gene Knockin,Sites and Expression in E. coli Chromosome |
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| CHEN Wei,LI Shan-Hu,YU Mei,WANG Ming-Gang,ZHOU Jian-Guang. pBR322-Red Mediated Gene Knockin,Sites and Expression in E. coli Chromosome[J]. Hereditas, 2006, 28(1) |
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| Authors: | CHEN Wei LI Shan-Hu YU Mei WANG Ming-Gang ZHOU Jian-Guang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | pBR322-Red |
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