酸性木聚糖酶XynⅡ活性中心关键氨基酸残基的鉴定 |
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引用本文: | 周晨妍,符丹丹,丰慧根,邬敏辰,王武.酸性木聚糖酶XynⅡ活性中心关键氨基酸残基的鉴定[J].生物技术,2010,20(2):17-20. |
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作者姓名: | 周晨妍 符丹丹 丰慧根 邬敏辰 王武 |
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作者单位: | 1. 新乡医学院生命科学技术系,河南省医学遗传学与分子靶向药物重点实验室,河南新乡453003 2. 河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳,471003 3. 江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡,214122 |
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摘 要: | 目的:鉴定来源于宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的酸性木聚糖酶XynⅡ活性中心关键氨基酸残基。方法:对XynⅡ进行SWISS-MODEL同源建模和BLAST序列比较,分析XynⅡ中所有可能作为催化残基的保守氨基酸,采用定点突变手段对其进行鉴定研究。结果:只有Glu-79和Glu-170位于酶与底物作用的活性中心,它们分别位于β折叠股B6和B4上,推测Glu-79和Glu-170为XynⅡ活性中心关键氨基酸残基。将Glu-79和Glu-170突变为酸性的Gln,突变酶E79Q,E170Q在大肠杆菌和毕赤酵母中表达后,活性均丧失。结论:79位、170位Glu是木聚糖酶XynⅡ活性中心的关键氨基酸残基,为该酶进一步的结构与功能研究提供了理论基础。
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关 键 词: | 酸性木聚糖酶 宇佐美曲霉 定点突变 活性中心 |
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