家蚕Aly/REF的基因克隆、序列分析及其细胞定位

RNA和输出因子结合蛋白（RNA and export factor binding proteins， REF/Aly）参与RNA的稳定、加工和输出。本研究参照已公开的家蚕Bombyx mori aly序列（GenBank登录号： DQ497195.1），通过RT-PCR克隆了家蚕aly/ref基因（Bmaly/ref）。测序结果显示，该基因的开放读码框为765 bp，编码254个氨基酸残基， BmAly/REF与黑腹果蝇Drosophila melanogaster、小鼠Mus musculus的同源体的氨基酸序列一致性分别为49.7%和52.7%。结构预测结果显示，BmAly/REF具有REF家族的与RNA结合的结构域RRM，N和C端分别具有REF-N和REF-基序。进化分析结果显示，昆虫的ALY/REF聚为一类，BmAly/REF与赤拟谷盗Tribolium castaneum、意大利蜜蜂Apis mellifera的Aly/REF较为接近。将Bmaly/ref基因克隆进pGS21a(+)载体进行原核表达，重组蛋白免疫小鼠，获得鼠抗BmAly/REF多抗。免疫荧光实验结果显示，BmAly/REF在细胞质和细胞核中均有分布，但主要分布在细胞核中。芯片数据分析显示Bmaly/ref基因在家蚕幼虫5龄第3天各组织中均有较高水平的表达。研究结果显示BmAly/REF可能在RNA的核输出方面发挥作用，为进一步探讨BmAly/REF的功能奠定了基础。

Cloning, sequence analysis and cellular localization of Aly/REF from the silkworm, Bombyx mori

RNA and export factor binding proteins (Aly/REF) play important roles in RNA stability, processing and nuclear export. Referring to the sequence of Bombyx mori aly gene (GenBank accession no.DQ497195.1), the aly/ref gene (Bmaly/ref) from the silkworm, B. mori, was cloned via RT-PCR. The sequencing result showed that the open reading frame(ORF) of Bmaly/ref is 765 bp in length, encoding 254 amino acid residues, and the amino acid sequence of BmAly/REF showed 49.7% and 52.7% identities with the homologs of Dr...