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| HER2胞外区基因的克隆及其在大肠杆菌中的可溶性表达 | |
| 引用本文： | 刘阳,孙志伟,俞炜源,黄海华.HER2胞外区基因的克隆及其在大肠杆菌中的可溶性表达[J].生物技术通讯,2005,16(3):252-254. |
| 作者姓名： | 刘阳 孙志伟 俞炜源 黄海华 |
| 作者单位： | 1. 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;沈阳药科大学,生物制药系,辽宁,沈阳,110016 2. 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071 3. 沈阳药科大学,生物制药系,辽宁,沈阳,110016 |
| 摘 要： | 采用反转录PCR和PCR方法分别克隆P185^HER2/neu胞外区基因和噬菌体M13K07g3p—N1结构域基因，然后将二偶联入pET-22b( )载体中，在大肠杆菌中进行融合表达。可溶性目的蛋白表达量占细菌可溶性表达产物总量的30％72右．并通过镍亲和层析纯化出目的蛋白。以上结果为从噬菌体抗体库中筛选抗P185^HER2/neu的抗体奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 大肠杆菌 胞外区 可溶性表达 基因 克隆 反转录PCR 噬菌体抗体库 目的蛋白 PCR方法 融合表达 层析纯化 表达产物 结构域 表达量 载体 细菌 |
| 文章编号： | 1009-0002(2005)03-0252-03 |
| 修稿时间： | 2004年12月13 |
Soluble Expression of Extracellular Region of HER2 in Escherichia coli |
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| LIU Yang,SUN Zhi-wei,YU Wei-yuan,HUANG Hai-Hua.Soluble Expression of Extracellular Region of HER2 in Escherichia coli[J].Letters in Biotechnology,2005,16(3):252-254. | |
| Authors: | LIU Yang SUN Zhi-wei YU Wei-yuan HUANG Hai-Hua |
| Institution: | LIU Yang1,2,SUN Zhi-wei1,YU Wei-yuan1,HUANG Hai-hua2 1. Institute of Biotechnology,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100071, 2. Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110016,China |
| Abstract: | The extracellular region gene of human P185HER2/neu and the gene of g3p-N1 domain were amplified by RT-PCR and PCR from sk-br-3 cell and M13KO7 phage respectively. Fused to 3'-terminus of the gene of g3p-N1 domain, the extracellular region gene of human P185HER2/neu was high-efficiently expressed in host E.coli by vector pET-22b( ). The fusion protein attaining to the 30% of the total protein which could be soluble expressed in E.coli was conveniently purified by chelating column (HisTrap HP Columns). This research made the basis of screening anti-P185HER2/neu antibody from recombinant phage-display antibody library. |
| Keywords: | HER2 gene expression Escherichia coli |
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