C2株贾第虫醛糖还原酶的原核表达与生物信息学分析北大核心 |
| |
引用本文: | 王皓钰,王沂,杨炘谕,邱明娟,蒋子禹,沈海娥,李冀,田喜凤,王洋.C2株贾第虫醛糖还原酶的原核表达与生物信息学分析北大核心[J].生物技术,2017(6):539-544. |
| |
作者姓名: | 王皓钰 王沂 杨炘谕 邱明娟 蒋子禹 沈海娥 李冀 田喜凤 王洋 |
| |
作者单位: | 1.华北理工大学临床医学院063000;2.华北理工大学附属医院检验科063000;3.华北理工大学生命科学学院063000; |
| |
基金项目: | 国家自然科学基金项目("蓝氏贾第鞭毛虫a-4和a-11贾第素的细胞定位和功能研究";No.31471954);河北省青年科学基金项目("蓝氏贾第鞭毛虫胞外核酸酶在抗宿主免疫中作用的研究";No.H2017209143) |
| |
摘 要: | 目的]克隆、原核表达、纯化C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)醛糖还原酶(Aldose reductase,AR)基因,并进行生物信息学分析。方法]从C2株贾第虫基因组DNA中克隆贾第虫AR编码区,双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),酶切和测序进行验证,并进行生物信息学分析;将构建成功的重组质粒pET-28a(+)-AR转化大肠杆菌Rosetta(DE3)并进行诱导表达,SDS-PAGE及Western Blot验证表达效果;镍亲和层析纯化AR蛋白,SDS-PAGE观察纯化效果。结果]成功克隆了C2株贾第虫AR蛋白编码区并构建了原核表达载体,SDS-PAGE及Western Blot显示,AR表达载体转化的大肠杆菌经诱导可表达出相对分子量约37.2k Da的目的蛋白,与预期一致;重组蛋白通过亲和层析获得了高效纯化;生物信息学分析显示贾第虫AR蛋白主要二级结构为无规则卷曲,整体为一个NADPH依赖的氧化还原酶结构域。AR蛋白在真核生物中相当保守,贾第虫AR蛋白在进化上相对独立。结论]证实了贾第虫AR蛋白的存在并明确了其结构和进化上的特征,为贾第虫AR抗体的制备和功能的研究提供了基础。
|
关 键 词: | 蓝氏贾第鞭毛虫 醛糖还原酶 原核表达 亲和层析 生物信息学分析 |
本文献已被 维普 等数据库收录! |
|