| 斑马鱼尿酸氧化酶基因的克隆与原核表达 |
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| 引用本文： | 匡红艳,荣俊,朱莹莹.斑马鱼尿酸氧化酶基因的克隆与原核表达[J].四川动物,2014(2). |
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| 作者姓名： | 匡红艳 荣俊 朱莹莹 |
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| 作者单位： | 长江大学临床医学院;长江大学生命科学学院; |
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| 摘 要： | 目的探讨斑马鱼尿酸氧化酶基因的克隆与原核表达的方法,研究重组斑马鱼尿酸氧化酶(ZUO)的理化性质与生物学功能。方法用PCR的方法克隆斑马鱼尿酸氧化酶基因,用pET28a质粒进行原核表达。结果成功克隆了斑马鱼尿酸氧化酶基因并完成了测序鉴定,该基因在大肠杆菌表达系统中得到有效表达且具有体外氧化尿酸的生物学功能。目的蛋白为胞内可溶性蛋白,占可溶蛋白总量的50%左右。最佳诱导条件为27℃16 h,粗酶最佳溶解pH为9.16,在此缓冲液溶解条件下,粗酶比活性为1.94 U/mg。获得的重组ZUO产量达64.8 U/g湿菌,高于直接从动物肝脏组织萃取的尿酸氧化酶。结论斑马鱼尿酸酶基因能在大肠杆菌表达系统中表达,其溶解pH比基因工程表达的重组猪尿酸氧化酶略低,对后续开发痛风治疗新药有利。
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| 关 键 词： | 斑马鱼 尿酸氧化酶 表达 |
Cloning and Prokaryotic Expression of Urate Acid Oxidase Gene of Zebrafish |
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