雅致枝霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达 |
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作者姓名: | 王德培 李明春 魏东盛 张颖慧 邢来君 孙伟 |
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作者单位: | 南开大学微生物系,天津市微生物功能基因组学重点实验室,天津,300071 |
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摘 要: | 根据真菌△^6 -脂肪酸脱氢酶基因保守的组氨酸Ⅱ区和Ⅲ区附近保守序列设计兼并引物进行RT-PCR,得到雅致枝霉(Thamnidium elegans)As3.2806△^6 -脂肪酸脱氢酶基因459bp部分cDNA序列,然后通过快速扩增cDNA末端技术(RACE)向两端延伸得到1504bp的△^6 -脂肪酸脱氢酶基因全长cDNA序列。序列分析表明有一个1377bp、编码459个氨基酸的开放阅读框TED6。推测的氨基酸序列与已知其他真菌的△^6 -脂肪酸脱氧酶基因的氨基酸序列比对,具有3个组氨酸保守区、2个疏水区及N末端细胞色素b5融合区。将此编码区序列亚克隆到酿酒酵母缺陷型菌株INVSel的表达载体pYES2.0中,构建表达载体pYTED6,并在酿酒酵母INVSel中异源表达。通过气相色谱(GC)和气相色谱,质谱(GC-MS)分析表明,该序列在酿酒酵母中获得表达,产生γ-亚麻酸(GLA)的含量占酵母总脂肪酸的7.5%。证明此序列编码的蛋白能将外加的亚油酸转化为γ-亚麻酸,是一个新的有功能的△^6 -脂肪酸脱氢酶基因(GenBank.AY941161)。
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关 键 词: | 雅致枝霉 △6-脂肪酸脱氢酶基因 γ-亚麻酸 酿酒酵母 表达 |
文章编号: | 0001-6209(2006)01-0074-06 |
修稿时间: | 2005-09-09 |
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