猪分离卵泡体外培养过程中Fas/FasL对颗粒细胞凋亡的作用

从猪卵巢分离完整有腔卵泡，按质量分为3类：健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡。猪分离卵泡经眼观检查后再行石蜡切片和HE染色，形态学研究表明，眼观检查对于健康卵泡的判定准确率为92％。取健康卵泡按直径大小分为3组：直径＞5 mm大卵泡组、3～5 mm中卵泡组和≤3 mm小卵泡组。卵泡培养8、16和24 h，以Annexin-V FITC/PI双染流式细胞仪检测壁层颗粒细胞凋亡情况，结果发现培养卵泡颗粒细胞的总凋亡率（早期凋亡＋晚期凋亡）在8 h时就已达到70%以上，至24 h则为81.1%～94.6%。收集无血清培养0、8、16、24、48和72 h的卵泡颗粒细胞，用real time PCR SYBRgreen法检测各组卵泡颗粒细胞FasL和Fas mRNA相对表达量。各级卵泡颗粒细胞中FasL mRNA水平随培养时间显著增加，培养至24 h达最大值（P＜0.05）；小卵泡颗粒细胞FasL mRNA水平均高于大、中卵泡组。各级卵泡颗粒细胞Fas mRNA相对表达量在培养前（0 h）差异不显著，8 h时显著增加，48 h达最大值。该实验表明，所用无血清卵泡培养体系可有效诱导卵泡颗粒细胞的凋亡，细胞凋亡是卵泡闭锁的主要诱因，但卵泡闭锁程度可因卵泡大小而异，小卵泡似乎更容易发生闭锁。

Role of Fas/FasL on Apoptosis of Porcine Follicular Granulose Cells Derived from Isolated Follicles During Culture in vitro