Paraglaciecola hydrolytica中新型β-琼胶酶Aga2的异源表达及酶学性质分析

琼胶寡糖具有抗氧化、抗肿瘤和调节肠道菌群等多种生物活性，而微生物来源的琼胶酶是酶法制备琼胶寡糖的重要工具酶。目前报道的琼胶酶数量较少，而具有优良酶学特性的琼胶酶数量更少，极大阻碍了酶法制备琼胶寡糖的工艺开发进程。因此有必要发掘更多微生物来源的新颖琼胶酶。从副居冰菌属Paraglaciecola hydrolytica细菌基因组中挖掘到一个新颖琼胶酶基因aga2，构建至表达载体 pET28a(+)，并在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行表达；通过镍金属亲和层析纯化蛋白并探究温度、pH、金属离子、NaCl浓度对Aga2活性的影响；采用¹³C核磁共振、薄层色谱和基质辅助激光解吸飞行时间质谱分析酶解产物。Aga2与已知琼胶酶的最高相似度为53.7%。同时Aga2在IPTG(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside)浓度为90 μmol/L，20℃下诱导9 h时，可溶性表达量最高。纯化的Aga2最适反应温度为50℃，且40℃孵育3 h后仍保持72.9%的相对酶活力，具有较好的温度稳定性。Aga2的最适pH为6.0，在不同pH(4-9)下放...