用重组大肠杆菌JM109(pKST11)转化苯生产顺-1,2-二羟基-3,5-环己二烯 |
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引用本文: | 曲向华,陈金春,马祺祥,孙世尧,陈国强.用重组大肠杆菌JM109(pKST11)转化苯生产顺-1,2-二羟基-3,5-环己二烯[J].生物工程学报,2003,19(1). |
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作者姓名: | 曲向华 陈金春 马祺祥 孙世尧 陈国强 |
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作者单位: | 1.新疆大学生物科学与技术学院微生物室,乌鲁木齐 830046;2.清华大学生物科学与技术系微生物实验室,北京 100084 |
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基金项目: | 中国航天科技创新项目,国家高技术研究发展计划(863计划) |
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摘 要: | 顺-1,2-二羟基-3,5-环己二烯(简称DHCD)是航天业、电子工业、医药业以及精细化工业上重要的手性化合物。利用重组E. coli JM109 (pKST11),采用适时监测发酵过程中全细胞甲苯双加氧酶(Toluene dioxygenase,TDO)活性的方法,研究了发酵生产DHCD工艺中的重要影响因子IPTG以及底物苯的供给方式对DHCD产量的影响。研究结果表明:(1)发酵初期利用IPTG诱导TDO的表达,不利于细胞生长,在对数生长中期(6或8h),采用0.5mmol/L IPTG即可诱导出TDO的最高表达。(2)发酵液中的苯对全细胞甲苯双加氧酶(TDO)的活性有抑制作用,而利用液体石蜡作为缓释剂进行两相法发酵则降低了苯的毒害,明显提高了DHCD的产量。当采用传统的通气供苯方法,DHCD的产量仅有75 g/L;批式添加液体石蜡与苯的混溶物使DHCD的产量提高到226 g/L,是通气供苯法的3倍;而采用流加的方式添加液体石蜡与苯的混溶物使DHCD的产量进一步提高到368 g/L,是通气供苯法的5倍。证明通过发酵工艺的优化可以解决苯的毒害与苯作为反应底物在水相中需要有一定浓度之间的矛盾,获得较好的转化结果。
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关 键 词: | 顺-1 2-二羟基3,5-环己二烯, 甲苯双加氧酶,重组大肠杆菌,生物转化 |
Biotransformation of Benzene to cis-1,2-dihydroxycyclohexa-3,5-diene Using Recombinant Escherichia coli JM109 (pKST11) |
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Abstract: | |
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