PTEN RNA干扰载体pSUPER的构建及功能鉴定

目的:构建抑制PTEN基因表达的pSUPER RNA干扰(RNAi)载体pSUPER PTEN并鉴定其功能。方法:化学合成一对编码短发夹RNA序列,靶向细胞PTEN基因的寡核苷酸链,退火,克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSU-PER质粒上,构建重组RNAi质粒pSUPER PTEN,通过双酶切鉴定及测序分析验证构建效果;将构建正确的质粒转染肝癌HepG2细胞,免疫印迹和qPCR检测HepG2中PTEN的表达及其对AKT信号通路的影响。结果:双酶切鉴定及测序结果分析表明碱基成功插入pSUPER PTEN载体指定位点,同时序列一致;免疫印迹结果证明pSUPER PTEN载体可抑制HepG2细胞中PTEN的表达,并且提高AKT的磷酸化水平。结论:靶向PTEN的pSUPER PTEN载体构建成功,该载体能够特异性抑制PTEN基因的表达。