人TNFα和AP融合基因的表达、纯化及功能鉴定

[目的]构建和表达人碱性磷酸酶(AP)与肿瘤坏死因子(TNFα)融合基因的真核表达蛋白。[方法]将TNFα基因克隆到真核表达载体p AP-tag2,转染到CHO细胞表达。通过AP亲和层析方法得到高纯度的AP-TNFα蛋白,利用配体-受体结合原理以及Octet系统检测其生物活性,免疫组化原理检测TNFα受体的分布。[结果]APTNFα重组质粒成功构建并表达,并得到高纯度的目的蛋白,测出它与其受体TNF-R2的亲和性,同时检测出TNFα受体在患者表皮组织的分布。[结论]p AP-TNFα质粒成功构建和表达,重组蛋白AP-TNFα与受体的亲和性常数为3.14×10-10M,同时发现自身免疫疾病患者TNFα受体表达过高。