高效转化法定向进化里氏木霉的纤维素酶

优化了根癌农杆菌介导的里氏木霉的转化方法,得出转化的最适条件:共培养pH 5.3、共培养温度24℃、乙酰丁香酮浓度200μmol/L、根癌农杆菌OD660值0.8、里氏木霉孢子预萌发时间3 h。此时转化率为13 000个转化子(以107个里氏木霉孢子计),是未优化条件下的27倍以上。利用此高效转化法,结合强化纤维二糖水解酶基因II表达的操作,从324个转化子中筛选到了1株优良的里氏木霉转化子C10,发酵5 d后,纤维二糖水解酶活力达(122.44±5.91)U/m L,是初始菌株的5.4倍;滤纸酶活力达(28.92±2.45)IU/m L,是初始菌株的4.3倍。与初始菌株所产纤维素酶相比,转化子C10所产纤维素酶降解玉米秸秆和稻草的能力有明显的提高。本研究为里氏木霉的基因工程改造及其纤维素酶的定向进化提供了有价值的实验数据。