家蚕淀粉酶基因的克隆、表达与分析

淀粉酶是家蚕体内比较重要的一种消化酶。利用real-time PCR技术对Bmamy5和Bmamy7基因在家蚕5龄3 d不同组织的mRNA转录水平进行了分析,结果显示Bmamy7只在家蚕5龄3 d中肠和马氏管组织中有转录,在中肠组织的转录高达3×10~9个拷贝/μg总RNA,在马氏管组织中的转录丰度较低,只有1.9×10~6拷贝/μg总RNA;Bmamy5只在中肠组织中有转录,转录水平为1.5×10~9个拷贝/μg总RNA。根据在家蚕转录组数据库中预测的编码家蚕淀粉酶的c DNA序列设计引物,利用RT-PCR技术克隆到两个家蚕淀粉酶基因Bmamy5和Bmamy7,Bmamy7基因长1 608 bp,ORF长1 512 bp,编码503个氨基酸;氨基酸序列分析表明Bmamy7具有典型的α-淀粉酶结构域。Bmamy5全长1 196bp,ORF长738 bp,编码245个氨基酸。对Bmamy5和Bmamy7进行了原核表达,Bmamy7重组蛋活性较弱,但未检测到Bmamy5重组蛋白的目的条带。研究结果为家蚕淀粉酶基因的研究与应用提供了参考。