| 稳定整合pTet-on载体小鼠胚胎干细胞株的建立 |
| |
| 引用本文： | 张梅英,李华,董婉维,杨葳,秦英,汪瑛,周生来,于洋,王惟,王太一,王禄增.稳定整合pTet-on载体小鼠胚胎干细胞株的建立[J].中国实验动物学报,2006,14(3):161-166. |
| |
| 作者姓名： | 张梅英 李华 董婉维 杨葳 秦英 汪瑛 周生来 于洋 王惟 王太一 王禄增 |
| |
| 作者单位： | 中国医科大学实验动物部,沈阳,110001 |
| |
| 摘 要： | 目的建立稳定整合Tet-on基因的ES-D3细胞系,用于人胰岛素基因(pTRE2-human-Ins)在ES-D3细胞中诱导表达调控的研究。方法通过电穿孔转染的方法,将pTet-on质粒导入ES-D3细胞中,利用G418的药物选择特性,对转染的ES-D3细胞进行压力筛选,用PCR和Southern blot方法进行DNA整合鉴定,并用瞬时转染荧光素酶报告基因(pTRE-Luc)对筛选的Tet-on阳性克隆株的功能进行鉴定。结果经400μg/mL的G418压力筛选后,获得了11个细胞克隆株,特异性核苷酸引物检测细胞基因组DNA,有9个ES-D3细胞株可以扩增出相应的核苷酸片段,部分Tet-on阳性ES-D3株Southern blot鉴定结果表明Tet-on基因片段已整合入ES-D3细胞基因组DNA,荧光素酶报告基因功能鉴定获得1株诱导表达倍率为21.31的ES-D3细胞株,且Tet-on基因阳性ES-D3细胞的形态和生长速度与正常ES-D3细胞没有差异。结论通过电穿孔转染的方法成功地获得1株诱导表达倍率为21.31的高表达ES-D3细胞株,为进行目的基因(pTRE2-human-Ins)在ES-D3细胞中转染和诱导表达打下了基础。
|
| 关 键 词： | 四环素诱导表达系统 电穿孔 ES-D3细胞 |
| 文章编号： | 1005-4847(2006)03-0161-06 |
| 修稿时间： | 2005年11月22 |
Establishment of a Mouse Embryonic Stem Cell Line Integrated with pTet-on Gene |
| |
| ZHANG Mei-ying,LI Hua,DONG Wan-wei,YANG Wei,QIN Ying,WANG Ying,ZHOU Sheng-lai,YU Yang,WANG Wei,WANG Tai-yi,WANG Lu-zeng.Establishment of a Mouse Embryonic Stem Cell Line Integrated with pTet-on Gene[J].Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica,2006,14(3):161-166. |
| |
| Authors: | ZHANG Mei-ying LI Hua DONG Wan-wei YANG Wei QIN Ying WANG Ying ZHOU Sheng-lai YU Yang WANG Wei WANG Tai-yi WANG Lu-zeng |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Tetracycline inducing expression system Electroporation ES-D_3 cell |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
