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| 四川白鹅CD4基因胞外去信号肽区的可溶性表达及纯化 | |
| 作者单位： | ;1.四川农业大学动物医学院预防兽医研究所;2.四川农业大学动物医学院禽病防治与研究中心;3.四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室 |
| 摘 要： | 根据Gen Bank公布的四川白鹅T细胞表面分子CD4基因序列设计特异性引物,扩增其胞外去信号肽区基因,将其构建成原核重组表达质粒go CD4-p ET-32a(+),并在大肠杆菌原核表达系统中进行可溶性表达并纯化,为进一步应用与研究提供基础。通过从成年四川白鹅胸腺组织中提取RNA,经反转录合成c DNA为模板扩增CD4基因胞外去信号肽区,并构建原核表达载体go CD4-p ET-32a(+)。在大肠杆菌Rosetta(DE3)p Lys S系统中进行原核表达,通过改变表达温度、培养基、诱导剂IPTG浓度、诱导时间以及抗性浓度等条件,最终获得可溶性表达并经NINTA亲和层析获得纯化蛋白。结果显示,鹅CD4胞外区蛋白只有在16℃的TB培养基中目的蛋白his-go CD4可表达,鉴定结果与预期相符,诱导表达成功且多以不可溶的包涵体形式存在。研究发现改变IPTG浓度对表达产物存在形式影响较大,最终筛选出以0.4 m M的IPTG条件作为可溶性表达的最佳诱导浓度。NI-NTA亲和层析获得纯化蛋白并经Western-blot验证。 |
| 关 键 词： | 四川白鹅 CD4 原核表达 可溶性蛋白 |
Soluble Expression and Purification of Extracellular Region without Signal Peptide of Sichuan White Goose CD4 Gene |
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