| vWF-ΔPro改善基于蛋白质剪接的双载体BDD-FVIII基因转移 |
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| 作者姓名： | 朱甫祥 杨树德 刘泽隆 屈慧鸽 迟晓艳 |
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| 作者单位： | (鲁东大学生命科学学院，烟台 264025) |
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| 基金项目： | 山东省自然科学基金(No. Y2005D14), 教育部留学回国人员科研启动基金(No. 2007［1108］),烟台市科技计划项目(No. 2008152)和鲁东大学学科建设经费资助项目 |
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| 摘 要： | 多聚体von Willebrand因子(vWF)的功能之一是保护凝血Ⅷ因子(FⅧ)免受蛋白水解引起的快速清除．前肽缺失突变体vWF (vWF-ΔPro)不能形成多聚体，但可以结合FⅧ蛋白．为探讨vWF-ΔPro对基于蛋白质反式剪接作用介导的双载体转FⅧ基因后连接的FⅧ蛋白的分泌和活性的影响，将vWF-ΔPro基因和融合Ssp DnaB内含肽的B结构域缺失型FⅧ(BDD-FⅧ)断裂基因共转染293细胞进行转基因的瞬时表达，用Western印迹检测了单独转染vWF-ΔPro基因细胞的vWF-ΔPro表达量和蛋白形式，并检测了其对FⅧ的结合力；用ELISA法观察分泌至培养上清中的剪接的BDD-FⅧ，并用Coatest法检测由其产生的生物活性．结果显示，vWF-ΔPro转基因细胞呈现二聚体蛋白表达形式，其结合FⅧ的能力与转野生型vWF基因细胞相近；vWF-ΔPro共转染细胞上清中剪接BDD-FⅧ蛋白浓度为198±21 ng/mL，活性为1.78±0.18 IU/mL，明显高于未转染vWF-ΔPro基因的细胞对照(91±12 ng/mL和1.05±0.13 IU/mL)，与共转染野生型vWF基因细胞对照相近(221±19 ng/mL和1.95±0.22 IU/mL)，表明vWF-ΔPro可显著改善内含肽剪接的BDD-FⅧ蛋白的分泌和生物活性．为vWF-ΔPro转基因的基于蛋白质剪接技术双AAV载体转BDD-FⅧ基因动物体内实验提供了依据．
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| 关 键 词： | von Willebrand因子 BDD-FⅧ 转基因 内含肽 蛋白质反式剪接 |
| 收稿时间： | 2010-04-13 |
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