牛miR-193a基因过表达和抑制的慢病毒构建及初步鉴定

目的:构建牛miR-193a过表达和抑制的慢病毒并进行初步鉴定。方法:根据miRBase数据库中牛miR-193a的前体序列设计引物;以MDBK细胞全基因组为模版,扩增pre-miR-193a和pre-miR-193a inhibitor基因;并克隆至慢病毒载体pLL3.7中;经酶切和测序鉴定后获得重组慢病毒载体;将重组慢病毒质粒分别与辅助质粒共转染至HEK-293T细胞中;转染48h后,收集慢病毒并感染MDBK细胞;感染48 h后,观察MDBK细胞中绿色荧光的分布情况,并收集细胞,提取总RNA并合成cDNA,实时定量PCR检测miR-193a表达水平。结果:成功构建了过表达和抑制miR-193a表达的慢病毒;pre-miR-193a慢病毒感染后miR-193a的表达水平显著性增加(约4.55倍);相反,pre-miR-193a inhibitor慢病毒感染后miR-193a表达水平显著性下调(约0.73倍)。结论:该研究成功构建了牛miR-193a过表达和抑制表达的慢病毒,为进一步的miR-193a的功能学研究奠定基础。