| 粪产碱菌(Alcaligenes faecalix)基因文库的构建和nifH基因同源顺序的克隆 |
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| 引用本文： | 海伟力,郑洪刚,尤崇杓,王斌. 粪产碱菌(Alcaligenes faecalix)基因文库的构建和nifH基因同源顺序的克隆[J]. 遗传学报, 1992, 0(4) |
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| 作者姓名： | 海伟力 郑洪刚 尤崇杓 王斌 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院原子能应用研究所，中国科学院遗传研究所，中国农业科学院原子能应用研究所，中国科学院遗传研究所 北京 100094，北京，北京 100094，北京 |
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| 摘 要： | 采用λ噬菌体置换型载体EMBL4,构建了Alcaligenes faecalis A-15 H1菌株总DNA的基因文库。用Sau3AⅠ限制酶完成部分酶切,取13—20kb大小的片段进行克隆。载体DNA经BamHⅠ和SaiⅠ完全双酶切,左右臂“退火”形成左右臂载体分子后再与外源片段连接。左右臂载体分子与外源片段按照1:1的分子比进行体外连接。用E.coli BHB2688和E.coli BHB2690制备的包装抽提物进行体外包装,所得基因文库效价测定为1.2×10~6 pfu,远远超过理论上所需的库容量。以nif H基因作为探针,经3轮噬菌斑原位杂交,从基因文库中筛选出含有其同源顺序的克隆,并得到了梯度点杂交的验证。对所得重组噬菌体克隆之一进行Southern转移杂交,结果证实,其3.5kb的EcoRⅠ酶切片段为nif H阳性杂交条带。将其克隆到质粒pUC19 DNA上后,转入受体菌JM101中。再次经Southern转移杂交,证明所得重组质粒克隆(pAFH)含有粪产碱菌中的与nifH基因有同源顺序的片段。
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| 关 键 词： | 粪产碱菌 基因文库 nif H基因 |
The Construction of Genomic Library of Alcaligenes faecalis and Cloning of infH Gene Sequence Homologous to Klebsiella pneumoinae |
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| Hai Weili Zheng Honggang You Chongpiao Wang Bin. The Construction of Genomic Library of Alcaligenes faecalis and Cloning of infH Gene Sequence Homologous to Klebsiella pneumoinae[J]. Journal of Genetics and Genomics, 1992, 0(4) |
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| Authors: | Hai Weili Zheng Honggang You Chongpiao Wang Bin |
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| Keywords: | Alcaligenes faecalis Genomic library nifH |
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