转译优化对EP0基因在cos7细胞中表达的影响

利用COS7细胞暂时表达系统，研究转译起始序列对EPO-cDNA表达的影响。通过DNA重组技术，构建了原EP0-cDNA表达载体pCSV-EP0(1)．其转译起始序列为5’AATTCATGG3’．同时通过定点突变技术，将起始序列改变成5’CCACCATGG3’，而构建了另一表达载体pCSv—EPO(2)。后者经序列分析证明无误后和前者均通过DEAE-dextran法转染COS7细胞，用ELlSA法定量洲量EP0表达水平．转染后48小时及72小时收集含pCSV—EP0(1)的COS7细胞上清．测定结果为1580pg／mI及954pg／mI，而含pCSV—EPO(2)的上清则为25 300pg／m1和17 450pg／ml。这表明经优化起始序列的基因表达远高于未经优化的。