新型海洋微生物β-葡萄糖苷酶基因的克隆、表达及重组酶性质 |
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作者姓名: | 房伟 方泽民 刘娟娟 洪宇植 彭惠 张学成 孙宝林 肖亚中 |
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作者单位: | 1. 安徽大学生命科学学院生物工程研究中心,合肥,230039 2. 中国科技大学生命科学学院,合肥,230026 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2007AA09Z421);;安徽省优秀青年科技基金(No.08040106908)资助~~ |
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摘 要: | 通过功能筛选方法,从中国南海海洋表层海水微生物元基因组文库筛选得到了6个β-葡萄糖苷酶阳性克隆。对其中的一个阳性克隆pSB47B2进一步亚克隆和序列分析,获得一新型β-葡萄糖苷酶基因(命名为bgl1B)开放阅读框。以pET22b(+)为载体、Escherichia coli BL21(DE3)为宿主菌,bgl1B被高效活性重组表达。通过Ni-NTA亲和层析柱纯化了重组Bgl1B(rBgl1B)。纯化的rBgl1B催化pNPG水解反应的最适pH为6.5,最适温度为40oC。在最适反应条件下,rBgl1B水解pNPG的活性达到39.7U/mg,Km和Vmax分别为0.288mmol/L、36.9μmol/min。纤维二糖是rBgl1B的有效作用底物,其Km和Vmax分别为0.173mmol/L、35μmol/min。但rBgl1B不能催化转化蔗糖、乳糖、麦芽糖以及CMC。rBgl1B催化pNPG的水解反应对高浓度的Na+有较好的耐受性,而低浓度的Ca2+、Mn2+对该酶活有一定促进作用。不同于许多来源于真菌的酸性β-葡萄糖苷酶,rBgl1B在pH7.0~9.0范围内具有比较高的酶活力并具有较好的稳定性。
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关 键 词: | 海洋微生物 元基因组 β-葡萄糖苷酶 葡萄糖苷水解酶Ⅰ |
收稿时间: | 2009-10-10 |
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