| 信号肽对亮氨酸脱氢酶在Bacillus subtilis中分泌表达的影响及酶学性质研究 |
| |
| 引用本文： | 王男,金吕华,张玲,林荣,杨海麟.信号肽对亮氨酸脱氢酶在Bacillus subtilis中分泌表达的影响及酶学性质研究[J].中国生物工程杂志,2018,38(4):46-53. |
| |
| 作者姓名： | 王男 金吕华 张玲 林荣 杨海麟 |
| |
| 作者单位： | 江南大学生物发酵与分离实验室 无锡 214122 |
| |
| 基金项目： | * 江苏省产学研资助项目(BY2016022-40) |
| |
| 摘 要： | 根据信号肽N端电荷数,选择Sec及Tat两种途径的信号肽构建枯草芽孢杆菌穿梭质粒,首次实现Bacillus cereus源亮氨酸脱氢酶基因在Bacillus subtilis中的分泌表达。Tat途径信号肽Pho D促进蛋白质分泌的效果最好,胞外酶活力达20.25U/ml,为不添加信号肽的2.2倍,信号肽N端较多的电荷数,可能有利于多聚体蛋白的分泌。对表达产物进行纯化和酶学性质测定。结果表明,纯酶比酶活为13U/mg;L-Leucine为底物时酶的K_m为6.17mmol/L,V_(max)为14.49μmol/(L·min);底物特异性研究发现,酶与天然底物L-Leucine的亲和性最好,对一些脂肪族氨基酸也有活性,对芳香族氨基酸L-Phenylalanine无活性;酶的最适pH为10.5~12.0,pH稳定范围为5.0~11.0;最适反应温度为55℃;圆二色谱变温扫描酶二级结构变化,α螺旋含量随温度升高逐渐降低;差示扫描微量热技术(DSC)测定酶的解折叠温度(Tm值)为64.13℃,表明该酶具有较好耐热性。
|
| 关 键 词： | 信号肽 亮氨酸脱氢酶 枯草芽孢杆菌 酶学性质 |
| 收稿时间： | 2017-11-23 |
The Effect of Signal Peptides on the Expression of Leucine Dehydrogenase and Enzymatic Properties in Bacillus subtilis |
| |
| Nan WANG,Lv-hua JIN,Ling ZHANG,Rong LIN,Hai-lin YANG.The Effect of Signal Peptides on the Expression of Leucine Dehydrogenase and Enzymatic Properties in Bacillus subtilis[J].China Biotechnology,2018,38(4):46-53. |
| |
| Authors: | Nan WANG Lv-hua JIN Ling ZHANG Rong LIN Hai-lin YANG |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Signal peptides Leucine dehydrogenase Bacillus subtilis Enzymatic properties |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国生物工程杂志》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国生物工程杂志》下载免费的PDF全文 |
|
