| 胆固醇氧化酶PsCO_4异源表达、纯化及酶学性质分析 |
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| 引用本文： | 郭倩倩,高登科,程晓涛,路福平,田之仓优,秦慧民.胆固醇氧化酶PsCO_4异源表达、纯化及酶学性质分析[J].中国生物工程杂志,2018,38(6):34-42. |
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| 作者姓名： | 郭倩倩 高登科 程晓涛 路福平 田之仓优 秦慧民 |
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| 作者单位： | 天津科技大学生物工程学院 省部共建食品营养与安全国家重点实验室 工业发酵微生物教育部重点实验室 天津 300457 |
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| 基金项目： | * 国家自然科学基金资助项目(31771911) |
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| 摘 要： | 胆固醇氧化酶专一性催化胆固醇为胆甾-4-烯-3-酮,广泛的应用于临床以及食品加工行业。本论文将来源于Pimelobacter simplex的胆固醇氧化酶PsCO_4,分别转化到大肠杆菌宿主BL21(DE3)、Rosetta(DE3)和C41(DE3)中,在不同温度(15℃、25℃、37℃)及IPTG诱导浓度(0.01mmol/L、0.1mmol/L、0.5mmol/L)下异源表达Ps CO_4。结果表明,转入Rosetta(DE3)菌株的PsCO_4蛋白,在IPTG浓度为0.1mmol/L、15℃下经18h诱导表达,PsCO_4可溶性表达量最高(0.63mg/ml)。异源表达的胆固醇氧化酶PsCO_4最适温度为30℃,最适pH为7.5。通过TLC,GC-MS检测出Ps CO_4催化胆固醇生成胆甾-4-烯-3-酮。以胆固醇和β-谷甾醇、豆甾醇和孕烯醇酮为底物,测定PsCO_4对四种底物的催化反应动力学参数,胆固醇k_(cat)/K_m为0.08s~(-1)·μM~(-1)分别高于β-谷甾醇(0.04s~(-1)·μM~(-1))、豆甾醇(0.005s~(-1)·μM~(-1))和孕烯醇酮(0.02s~(-1)·μM~(-1))。
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| 关 键 词： | 胆固醇氧化酶 催化活性 酶学性质 底物特异性 |
| 收稿时间： | 2018-01-08 |
Heterologous Expression,Purification and Enzymatic Characterization of Cholesterol Oxidase PsCO4 |
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| Qian-qian GUO,Deng-ke GAO,Xiao-tao CHENG,Fu-ping LU,Tanokura Masaru,Hui-min QIN.Heterologous Expression,Purification and Enzymatic Characterization of Cholesterol Oxidase PsCO4[J].China Biotechnology,2018,38(6):34-42. |
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| Authors: | Qian-qian GUO Deng-ke GAO Xiao-tao CHENG Fu-ping LU Tanokura Masaru Hui-min QIN |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cholesterol oxidase Catalytic activity Enzymatic property Substrate specificity |
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