单增李斯特菌CdaA的抗原表位分析及抗体的制备 |
| |
引用本文: | 孙静娟,邱景璇,曾海娟,丁承超,王广彬,李杰,王淑娟,刘箐.单增李斯特菌CdaA的抗原表位分析及抗体的制备[J].生物技术通报,2018(5). |
| |
作者姓名: | 孙静娟 邱景璇 曾海娟 丁承超 王广彬 李杰 王淑娟 刘箐 |
| |
作者单位: | 上海理工大学医疗器械与食品学院;徐州绿健乳品饮料有限公司 |
| |
摘 要: | 生物信息学分析结果显示单增李斯特菌腺苷酸环化酶CdaA具有良好的种内保守性、种间特异性和抗原表位结构,本研究对该蛋白的免疫原性进行验证并制备单克隆抗体,拟以CdaA为检测靶标检测单增李斯特菌。考虑到跨膜区可能会阻碍CdaA的表达,因而构建pET30a-Δ300cdaA并诱导表达Δ100CdaA。以纯化的Δ100CdaA制备的多克隆抗体效价可达1∶128 000。Western-blotting分析表明多抗能够识别从单增李斯特菌中提取的CdaA。另外,筛选得到一株单克隆抗体,3F8,单抗效价可达1∶512 000。Western blotting分析可知该单抗能够与9株单增李斯特菌和2株非致病李斯特菌的提取蛋白结合,并且与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等7株其他菌种的提取蛋白不结合,表明该单抗具有良好的特异性。利用生物信息学筛选检测靶标并分析抗原表位结构,最后成功制备多克隆抗体和单克隆抗体。
|
本文献已被 CNKI 等数据库收录! |
|