| 定点突变提高醇脱氢酶LkTADH催化制备他汀关键手性砌块的酶活 |
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| 引用本文： | 陈方,徐刚,杨立荣,吴坚平.定点突变提高醇脱氢酶LkTADH催化制备他汀关键手性砌块的酶活[J].中国生物工程杂志,2018,38(9):59-64. |
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| 作者姓名： | 陈方 徐刚 杨立荣 吴坚平 |
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| 作者单位： | 浙江大学化学工程与生物工程学院生物工程研究所 杭州 310027 |
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| 基金项目： | * 国家自然科学基金面上项目(21676240);国家973计划(2011CB710800) |
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| 摘 要： | (S)-6-氯-3-羰基-5-羟基己酸叔丁酯(S)-CHOH]是他汀类药物合成的关键手性中间体。利用醇脱氢酶催化6-氯-3,5-二羰基己酸叔丁酯不对称合成(S)-CHOH是很有潜力的制备路线,目前存在的主要问题是醇脱氢酶催化活性较低。首先对来源于Lactobacillus kefir DSM 20587的醇脱氢酶的四点突变体LkTADH(A94T/F147L/A202L/L199H)进行回复突变,确定了关键位点147和202,并获得比酶活提高1倍的突变体MF147L-A202L。对这两个位点进行饱和突变,获得比酶活比LkTADH提高1.47倍的突变体MF147I-A202L。其比酶活为10.17U/mg,为目前文献报道最高水平。通过动力学分析和分子对接,分析了突变位点对酶活影响的机制,为后续研究奠定了良好的基础。
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| 关 键 词： | 醇脱氢酶 (S)-6-氯-3-羰基-5-羟基己酸叔丁酯 不对称合成 分子改造 饱和突变 |
| 收稿时间： | 2018-03-09 |
Enhancing the Activity of LkTADH by Site-Directed Mutagenesis to Prepare Key Chiral Block of Statins |
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| Fang CHEN,Gang XU,Li-rong YANG,Jian-ping WU.Enhancing the Activity of LkTADH by Site-Directed Mutagenesis to Prepare Key Chiral Block of Statins[J].China Biotechnology,2018,38(9):59-64. |
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| Authors: | Fang CHEN Gang XU Li-rong YANG Jian-ping WU |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Alcohol dehydrogenase (S)-tert-butyl-6-chloro-5-hydroxyl-3-oxohexanoate Asymmetric synthesis Molecular modification Saturated mutation |
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