| X射线衍射晶体法解析脱卤酶DehDIV-R结构的研究 |
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| 引用本文： | 童超迪,吴坚平,杨立荣,徐刚. X射线衍射晶体法解析脱卤酶DehDIV-R结构的研究[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(8): 19-25. DOI: 10.13523/j.cb.20180803 |
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| 作者姓名： | 童超迪 吴坚平 杨立荣 徐刚 |
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| 作者单位： | 浙江大学化学工程与生物工程学院 杭州 310027 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(21076187);国家973计划(2011CB710800) |
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| 摘 要： | R-2-卤代酸脱卤酶能立体选择性水解R-2-卤代酸。解析酶的单晶结构对提高酶的选择性和活性提供了直接的结构指导,是目前酶结构领域研究的前沿。以实验室前期得到的来自假单胞菌ZJU26的R-2-氯丙酸脱卤酶(Deh DIV-R)为研究对象,采用X射线衍射晶体法进行结构解析。采用pp SUMO载体融合表达Deh DIV-R蛋白,依次通过Ni-NTA亲和层析、透析酶切、二次NiNTA亲和层析以及凝胶过滤层析纯化得到单一条带,且均一性好的蛋白。接着对结晶条件进行初筛与优化,得到的最佳结晶条件为0.1mol/L HEPES p H 7,12%PEG 6 000,0.2mol/L Mg Cl2,8mmol/L CHAPS。晶体在上海同步辐射光源BL18U1线站上收集衍射数据,采用分子置换法成功解析获得了分辨率为2.35的Deh DIV-R的晶体结构。Ramachandran图表明98.02%的氨基酸位于最适区,证明了该结构的合理性。Deh DIV-R的纯化、结晶以及结构解析为进一步深入了解其结构和功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | R-2-卤代酸脱卤酶 纯化 结晶 X射线衍射 |
| 收稿时间： | 2018-03-09 |
Crystal Structural Analysis of DehDIV-R by X-ray Crystallography |
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| Chao-di TONG,Jian-ping WU,Li-rong YANG,Gang XU. Crystal Structural Analysis of DehDIV-R by X-ray Crystallography[J]. China Biotechnology, 2018, 38(8): 19-25. DOI: 10.13523/j.cb.20180803 |
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| Authors: | Chao-di TONG Jian-ping WU Li-rong YANG Gang XU |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | R-2-haloacid dehalogenase Purification Crystallization X-ray diffraction |
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