| 香鱼主要组织相容性复合体MHCIIB的分子克隆及其在鳗弧菌感染下的功能鉴定 |
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| 引用本文： | 李长红,丁斐斐,余莉,陈炯.香鱼主要组织相容性复合体MHCIIB的分子克隆及其在鳗弧菌感染下的功能鉴定[J].中国生物化学与分子生物学报,2018,34(10):1091-1102. |
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| 作者姓名： | 李长红 丁斐斐 余莉 陈炯 |
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| 作者单位： | （宁波大学海洋学院生物系，浙江 宁波315211) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No.30471975，No.31402333)；浙江省自然科学基金项目(No.LZ18C190001，No.LY17C190003)和宁波市自然科学基金项目(No.2017A610284，No.2017A610285，No.2017A610174)资助 |
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| 摘 要： | 主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex classⅡ, MHC Ⅱ)在脊椎动物免疫反应中发挥重要作用。本研究从香鱼(Plecoglossus altivelis) 单核/巨噬细胞(monocytes/ macrophages，MO/MФ)转录组中获得了MHC II基因β链(PaMHCIIB) cDNA序列。PaMHCIIB由920个核苷酸组成，包含一个大的开放阅读框，编码251个氨基酸，预测分子质量为28.23 kD。氨基酸序列分析表明，PaMHCIIB具有MHC IIB的典型特征，主要包括信号肽、2个胞外区和1个保守的connecting peptide/transmembrane/cytoplasmic (CP/TM/CYT)结构域，与北极红点鲑(Salvelinus alpinus) MHC IIB同源性最高，为65.04%；系统发育分析表明，PaMHCIIB与北极红点鲑MHC IIB进化相关性最高。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qPCR)结果显示，PaMHCIIB mRNA主要在香鱼鳃、肠和脾中表达；鳗弧菌感染(Vibrio anguillarum)后香鱼肝中PaMHCIIB mRNA在感染后12 h(hours post infection, hpi)时上调显著，在24 hpi达到峰值，为对照组的3.18倍，脾、头肾、肠和鳃中PaMHCIIB mRNA均在4 hpi时上调显著，分别在4、8、24和12 hpi时达到峰值，分别为对照组的85.18、2.06、4.21和6.81倍(P<0.05)。香鱼MO/MФ经鳗弧菌感染后，PaMHCIIB mRNA的表达水平在4 hpi时上调显著，在12 hpi时达到峰值，为对照组的3.35倍(P<0.05)。原核表达了PaMHCIIB胞外区并制备其抗体。Western 印迹分析结果表明，香鱼MO/MФ中PaMHCIIB具有N糖基化修饰，且鳗弧菌感染后其蛋白表达水平在12 hpi时显著增加，在24 hpi时达到峰值，为对照组的3.19倍(P<0.05)。抗体封闭PaMHCIIB后，香鱼MO/MФ吞噬活性被抑制，为对照组的0.28倍(P<0.05)，而且鳗弧菌诱导的4个细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10和TGF-β表达均受到抑制，均在8 hpi时被抑制最明显，表达量分别为对照组的0.23、0.41、0.51和0.20倍(P<0.05)。本研究结果揭示PaMHCIIB可能参与香鱼MO/MФ抵抗病原菌感染的免疫防御。
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| 关 键 词： | 香鱼 主要组织相容性复合体 鳗弧菌 基因表达 单核/巨噬细胞 |
| 收稿时间： | 2018-05-03 |
Molecular Cloning of The Major Histocompatibiliby Complex ΙΙB and its Function Identification in Ayu (Plecoglossus altivelis) on Vibrio anguillarum Infection |
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| LI Chang-Hong,DING Fei-Fei,YU Li,CHEN Jiong.Molecular Cloning of The Major Histocompatibiliby Complex ΙΙB and its Function Identification in Ayu (Plecoglossus altivelis) on Vibrio anguillarum Infection[J].Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology,2018,34(10):1091-1102. |
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| Authors: | LI Chang-Hong DING Fei-Fei YU Li CHEN Jiong |
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| Institution: | (Department of Biology, School of Marine Sciences, Ningbo University, Ningbo 315211, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Plecoglossus altivelis major histocompatibility complex class IIB Vibrio anguillarum gene expression monocytes/macrophages |
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