| 人类线粒体肌酸激酶uMtCK的底物结合位点分析 |
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| 引用本文： | 孟浩毅,李丹阳,孙正阳,杨兆勇,张志斐,袁丽杰.人类线粒体肌酸激酶uMtCK的底物结合位点分析[J].中国生物工程杂志,2018,38(5):24-32. |
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| 作者姓名： | 孟浩毅 李丹阳 孙正阳 杨兆勇 张志斐 袁丽杰 |
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| 作者单位： | 1 华北理工大学基础医学院 河北省慢性疾病重点实验室 唐山市慢性病临床基础研究重点实验室 唐山 0630002 华北理工大学药学院 唐山 0630003 中国医学科学院医药生物技术研究所 北京 100050 |
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| 基金项目： | * 河北省自然科学基金(C2014209137);中国医学科学院医学与健康科技创新工程资助项目(2016-I2M-3-022);中国医学科学院医学与健康科技创新工程资助项目(2016-I2M-3-012) |
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| 摘 要： | 研究人类线粒体肌酸激酶u Mt CK的结合位点,将其与底物肌酸和ATP结合有关的关键氨基酸进行突变,并对突变体进行酶动力学和圆二色谱数据分析,探讨这些关键氨基酸在底物识别和催化过程中的作用。结果显示,与野生酶相比,突变体Q313A和R336A的K_m~(Cr)分别提高了2.6和2.9倍,k_(cat)下降了19%和55%;同样地,与ATP结合相关的突变体R125A和R287A分别使得K_m~(ATP)升高了3.2和4.2,k_(cat)下降了72%和38%。以上结果表明突变体R125A、R287A、Q313A和R336A影响对底物的结合,同时也降低了酶促反应的速度。利用圆二色谱比较野生酶与不同突变体的二级结构并无明显变化,但进一步的结构模拟表明底物结合位点氨基酸在与底物之间的氢键对底物的识别和酶催化过程中发挥着重要作用。
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| 关 键 词： | 肌酸激酶 定点突变 酶动力学 结构模拟 |
| 收稿时间： | 2017-12-17 |
Substrate-binding Site of Ubiquitous Mitochondrial Creatine Kinase from Homo sapiens |
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| Hao-yi MENG,Dan-yang LI,Zheng-yang SUN,Zhao-yong YANG,Zhi-fei ZHANG,Li-jie YUAN.Substrate-binding Site of Ubiquitous Mitochondrial Creatine Kinase from Homo sapiens[J].China Biotechnology,2018,38(5):24-32. |
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| Authors: | Hao-yi MENG Dan-yang LI Zheng-yang SUN Zhao-yong YANG Zhi-fei ZHANG Li-jie YUAN |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Creatine kinase Site-directed mutagenesis Enzyme kinetics Structural simulation |
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