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| 慢病毒介导N2ICD过表达的人胃癌MKN45细胞稳定株的构建及鉴定 | |
| 作者姓名： | 吴丹琳 温俊杰 叶健斌 薛杨 林彦青 胡冰心 罗美群 陈中标 谢金玲 宁立军 宁云山 李妍 |
| 作者单位： | 南方医科大学检验与生物技术学院;珠海南医大生物医药公共服务平台有限公司;南方医科大学附属佛山医院;南方医科大学附属新会医院检验科 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目("幽门螺杆菌Lpp20抗原引起的免疫优势CD4+T细胞应答及与胃部疾病的相关性"；No.81470831)；国家自然科学基金-广东省联合基金重点项目("番荔枝内酯防治肿瘤的关键科学问题及纳米靶向制剂成药性研究"；No.U1401223)；广州市产学研协同创新重大专项("anti-VEGF单克隆抗体的临床研究"；No.201604010057)；国家级大学生创新训练项目("利用CPISPR-cas9构建Notch2信号通路缺陷的胃癌胞株"；No.201612121034)；深圳市卫生计生系统科研项目("数字PCR技术在早期诊断新生儿B族链球菌感染中的应用"；No.201606028) |
| 摘 要： | [目的]构建慢病毒介导Notch2受体胞内段((Notch2 intracellular domain,N2ICD)过表达的人胃癌MKN45细胞稳定株并进行鉴定。[方法]采用PCR法扩增N2ICD基因并克隆至慢病毒载体PTYE-EF1α-IRES-EGFP(简写为pLV)中,通过酶切及测序鉴定后,三质粒共转染HEK293T细胞包装病毒,收集且浓缩病毒毒液用于感染人胃癌MKN45细胞并筛选稳定细胞株,用Western Blot验证。[结果]成功构建慢病毒重组质粒N2ICD/pLV;包装病毒后,荧光显微镜下观察到大部分HEK293T细胞发出绿色荧光;收集病毒毒液感染MKN45细胞,显微镜下观察有部分细胞表达绿色荧光蛋白;流式分选技术筛选得到稳定细胞株,Western Blot鉴定结果显示:相比于空白对照组,稳定株的N2ICD过表达明显。[结论]成功构建慢病毒表达质粒N2ICD/pLV,并建立稳定过表达N2ICD的胃癌细胞株N2ICD/pLV-MKN45。 |
| 关 键 词： | Notch2 N2ICD 慢病毒 稳定株 |
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