LMP-1单链抗体基因修饰人外周血单个核细胞的构建及鉴定 |
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引用本文: | 李梦苑,叶传涛,范 超,张沛欣,张 颖,贾战生. LMP-1单链抗体基因修饰人外周血单个核细胞的构建及鉴定[J]. 现代生物医学进展, 2018, 0(8): 1441-1446 |
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作者姓名: | 李梦苑 叶传涛 范 超 张沛欣 张 颖 贾战生 |
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作者单位: | 第四军医大学唐都医院传染科 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(81601749) |
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摘 要: | 目的:构建携带抗-1型潜伏膜蛋白(anti-LMP-1)的单链抗体序列的过表达载体并包装慢病毒,构建及鉴定LMP-1单链抗体基因修饰的人外周血单个核细胞(PBMCs)。方法:根据Gen Bank中LMP-1单链抗体、CD28及CD3ζ序列设计引物并合成,从已有pVitro-IgG-1载体钓取IgG-1-Fc段,并分别插入慢病毒表达载体,获得p CDH-anti-LMP-1-IgG-Fc-CD28-CD3ζ(CAR)及pCDH-CD28-CD3ζ(对照VEC)并测序鉴定,测序成功后采用三质粒包装系统(核心质粒pCDH、包装质粒pSPAX2和pMD2.G)分别包装慢病毒CAR及VEC;浓缩慢病毒并离心感染PBMCs,经荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,并利用流式细胞术检测GFP+比率以鉴定目的蛋白的表达。结果:构建了过表达LMP-1单链抗体基因的质粒并成功包装慢病毒,浓缩慢病毒感染PBMCs后GFP+细胞数可达42.5%(VEC-PBMCs)及51.0%(CAR-PBMCs)。结论:为进一步研究anti-LMP-1修饰的PBMCs对LMP-1阳性肿瘤细胞的靶向杀伤奠定了实验基础。
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关 键 词: | 潜伏膜蛋白1型;慢病毒;嵌合抗原受体 |
收稿时间: | 2017-10-29 |
修稿时间: | 2017-11-23 |
Construction and Identification of Anti-EBV LMP-1 Single Chain Variable Fragment Antibody Modified Peripheral Blood Mononuclear Cells |
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Abstract: | |
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Keywords: | Latent membrane protein 1 Lentivirus Chimeric antigen receptor |
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