藻红蛋白的高效异源生物合成及其生物活性 |
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作者姓名: | 郑彩云 陈华新 姜鹏 季更生 |
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作者单位: | 江苏科技大学生物技术学院;中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室;青岛海洋科学与技术国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室 |
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基金项目: | 青岛市市南区科技发展资金项目(“海洋藻胆蛋白荧光探针与肿瘤体外诊断试剂的研制”,No.2016-3-010-ZH) |
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摘 要: | [目的]实现藻红蛋白在大肠杆菌中的高效生物合成。[方法]将藻红蛋白生物合成的多个基因构建到单一表达质粒上,质粒转化大肠杆菌后获得表达菌株,优化诱导物、诱导温度和诱导时长等发酵条件,利用亲和层析法分离纯化重组藻红蛋白,分析重组蛋白的光谱学性质与抗氧化活性。[结果]获得了高效生物合成藻红蛋白的大肠杆菌菌株,以乳糖为诱导物时最佳诱导条件为:2.0 g/L的乳糖、25℃下诱导28 h,藻红蛋白表达量达211.6 mg/L;以IPTG为诱导物时最佳诱导条件为:0.4 mmol/L的IPTG,在25℃条件下诱导28 h,藻红蛋白表达量达188.7 mg/L。藻红蛋白色基结合率达92.0%,OD555/OD280为8.0。[结论]成功实现了藻红蛋白在大肠杆菌中的高效生物合成,重组藻红蛋白具有羟基自由基的清除活性。
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关 键 词: | 藻红蛋白 乳糖 IPTG 抗氧化活性 |
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