hOPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠模型的建立 |
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引用本文: | 许勇,项佑贵,严兰珍,王龙,徐国江,费俭,傅继粱,王铸钢.hOPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠模型的建立[J].中国生物工程杂志,2005,25(11):17-20. |
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作者姓名: | 许勇 项佑贵 严兰珍 王龙 徐国江 费俭 傅继粱 王铸钢 |
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作者单位: | 1. 上海第二医科大学医学遗传学教研室, 上海 201203;
2. 上海南方模式生物研究中心, 上海 201203 |
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基金项目: | 国家“863”计划资助项目(2004AA216080),上海市科技发展基金资助项目(99JC14029,99XD14005) |
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摘 要: | 目的:建立带有人类骨保护素OPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠模型,为OPG体内转录水平的表达调控研究和药物筛选创造条件。方法:将克隆到的人类OPG基因5′端上游6.0kb非翻译序列作为启动子,大肠杆菌编码β半乳糖苷酶的LacZ基因作为报告基因,构建表达载体pCINeoOPGLacZ。经显微操作注射到受精卵原核中,经PCR以及Southern印迹杂交鉴定转基因阳性小鼠;用RTPCR分析LacZ在组织中的表达;利用邻硝基苯βD半乳吡喃糖苷(ONPG)作为底物反应后比色分析组织中的β半乳糖苷酶活性。结果:构建完成的表达载体pCINeoOPGLacZ质粒经酶切和测序鉴定序列正确,线性化后显微注射。PCR以及Southern印迹杂交鉴定获得了10只转基因小鼠(Founders),经交配繁育,建立了5个转基因小鼠系,RTPCR分析表明其中一个系小鼠组织中表达LacZ基因,与内源OPG表达模式一致,组织中可以广泛检测到相应的β半乳糖苷酶活性。结论:成功建立了人类OPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠,为体内研究OPG转录水平的表达及药物筛选提供了理想的动物模型。
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关 键 词: | 人类骨保护素 启动子 报告基因 转基因小鼠 |
收稿时间: | 2005-03-03 |
修稿时间: | 2005-09-05 |
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