ZNF268基因启动子区的克隆及功能分析

锌指基因家族是人体中最大的基因家族，它参与细胞分化、胚胎发育，并与许多疾病的发生相关。人类ZNF268基因是一个在人胚肝中特异性表达的C2H2型锌指基因，并可能在人的早期肝脏发育中起重要作用。为了研究ZNF268基因表达调控的分子机制，以正常人总基因组为模板PCR扩增了ZNF268基因的5′调控区2533bp片段，并将此片段插入启动子缺失的EGFP(增强型绿色荧光蛋白)载体构建了重组质粒pZNF268—EGFP。用脂质体介导的方法将pZNF268—EGFP转染NIH／3T3、COS7、K562、HeLa4个细胞系。在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光的表达，发现在每个细胞系中，转染了重组质粒pZNF268—EGFP的细胞均有荧光表达，但其起始表达时间均晚于转染了阳性对照质粒pEGFP—C1的细胞且荧光较弱。这表明ZNF268基因的5′调控区2．5kb片段是一个有功能的启动子，但该启动子与CMV启动子相比活性较弱。选择易培养的HeLa细胞系用于缺失研究。将一系列5′端—2456bp至—20bp缺失、3′端均为 77bp的缺失片段插入启动子缺失的CAT(氯酶素酰胺转移酶)载体构建了一系列重组质粒。将这些重组质粒转染HeLa细胞系进行缺失分析，并通过共转染pCMV—Sport—βgal质粒校正转染效率。结果表明，ZNF268启动子—2456～—1639bp区域可能含有正调控元件，—1244～—1013bp和—525～—156bp区域可能含有负调控元件，ZNF268启动子激活转录的一个重要区域位于—156～—20bp。

Cloning and Functional Analysis of the Promoter of ZNF268 Gene