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猪轮状病毒vp4基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达
引用本文:宋岩,师东方,樊琛,刘胜旺,魏华,李一经. 猪轮状病毒vp4基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达[J]. 中国病毒学, 2005, 20(1): 61-64
作者姓名:宋岩  师东方  樊琛  刘胜旺  魏华  李一经
作者单位:1. 东北农业大学动物医学院病原分子生物学实验室,黑龙江,哈尔滨,150030
2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001
3. 东南大学医学院微生物学教研室,江苏,南京,210009
基金项目:黑龙江省"十五"攻关项目(GC02B510)
摘    要:本研究扩增猪轮状病毒中国分离株JL94株VP4蛋白主要抗原编码区基因(1-756 bp),将测序结果与国外分离株进行比较;将该基因片段同载体pMel BacA连接后,与杆状病毒DNA共转染入昆虫细胞Sf9,经蚀斑筛选纯化重组病毒并再感染Sf9细胞获得vp4基因的表达,对表达的VP4蛋白进行Western blot分析和血清中和抗体试验.结果表明JL94株VP4主要抗原编码区基因与国外分离株CRW-8株、Gottfried株该基因片段氨基酸同源性分别为96.43%和67%,说明JL94株与CRW-8株属同一VP4血清型,而与Gottfried株属不同血清型.JL94株VP4主要抗原编码区氨基酸最大变异处位于aa81-aa207.vp4基因在昆虫细胞中表达量占细胞总蛋白的20%,Western Blot证实表达蛋白有良好的生物学活性.所表达的蛋白免疫小鼠产生中和抗体,阻断JL94在MA104细胞上引起的细胞病变.

关 键 词:猪轮状病毒  vp4基因  主要抗原编码区基因  克隆  真核表达
文章编号:1003-5125(2005)01-0061-04
修稿时间:2004-08-10

Cloning of vp4 Gene from Porcine Rotavirus JL94 Isolate and Expression in Baculovirus System
SONG Yan,SHI Dong-fang,FAN Chen,LIU Sheng-wang,LI Yi-jing. Cloning of vp4 Gene from Porcine Rotavirus JL94 Isolate and Expression in Baculovirus System[J]. Virologica Sinica, 2005, 20(1): 61-64
Authors:SONG Yan  SHI Dong-fang  FAN Chen  LIU Sheng-wang  LI Yi-jing
Abstract:
Keywords:Porcine rotavirus(PRV)   vp4 gene   Clone   Major antigen site   Eukaryotic expression
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