猪CACNA1S基因部分序列的克隆、测序及SNP检测

CACNA1S是钙离子通道主效亚基α1亚单位的编码基因，该基因突变会导致人（Homo sapiens）低钾性周期性麻痹和恶性高温综合征．目前CACNAIS基因的研究主要集中在人和模式动物上，而在家畜中的研究少见报道．本研究以金华猪（115头）、皮特兰猪（30头）、金华猪与皮特兰猪杂交产生的金皮F2代杂种猪（126头）、大约克猪（23头）为研究对象，根据人CACNA1S基因序列设计引物，对猪基因组DNA进行PCR扩增、克隆测序，并与人相应序列作同源性比较，然后采用PCR-SSCP技术检测序列中可能存在的单核苷酸多态（single nucleotide polymorphism，SNP）位点，并对有合适内切酶存在的突变点应用PCR-RFLP技术进行验证．结果表明：（i）用6对引物对猪基因组DNA进行扩增，共克隆得到猪CACNAIS基因约5211bp的DNA序列，其中外显子区域，猪与人同源性为82．6％，序列已递交GeneBank收录（登录号DQ767693）；（ii）在克隆得到的DNA序列中，共检测到57个单核苷酸突变点，其中外显子区域存在24个；（iii）突变位点的PCR-RFLP验证与PCR-SSCP检测结果一致，经与GenBank公布的猪CACNAIS基因EST小片段（Bx914582，Bx666997）比较，相应长度核酸序列内本实验检测到的11个SNP位点中，有8个位点的碱基突变与2个EST片段间存在的碱基差异相同．