| 7-木糖紫杉烷糖基水解酶LXYL-P1-1和LXYL-P1-2活性中心预测及初步的功能分析 |
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| 引用本文： | 王芬,朱平.7-木糖紫杉烷糖基水解酶LXYL-P1-1和LXYL-P1-2活性中心预测及初步的功能分析[J].菌物学报,2013,32(5):846-854. |
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| 作者姓名： | 王芬 朱平 |
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| 作者单位： | 北京协和医学院 中国医学科学院 药物研究所 天然药物活性物质与功能国家重点实验室 卫生部天然药物生物合成重点实验室 北京 100050;北京协和医学院 中国医学科学院 药物研究所 天然药物活性物质与功能国家重点实验室 卫生部天然药物生物合成重点实验室 北京 100050 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（No. 30770229，No. 31270796） |
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| 摘 要： | 7-木糖紫杉烷糖基水解酶LXYL-P1-1和LXYL-P1-2是克隆自真菌香菇的两个双功能酶(序列一致性97%),具有β-木糖苷酶/β-葡萄糖苷酶双重活性,能特异性地水解移除7-木糖-10-去乙酰紫杉醇等紫杉烷上的木糖基。采用生物信息学方法对两个酶蛋白进行酶活性中心预测,初步确定Asp300和Glu529分别为亲核试剂和一般酸/碱催化剂,而Asn172-Gly173-Arg174和Lys207-His208为底物结合结构域。以LXYL-P1-2为研究对象,以毕赤酵母细胞为表达宿主,应用定点突变技术获得了N172A、G173A、R174A、K207A、H208A、D300N和E529Q突变体,并进行了酶活性分析。结果显示:在分别以PNP-Xyl、PNP-Glc和7-木糖-10-去乙酰紫杉醇为底物时,N172A、G173A、R174A、K207A、D300N和E529Q的β-木糖苷酶与β-葡萄糖苷酶活性大幅度下降甚至完全消失;H208A的β-木糖苷酶活性也显著下降,但仍保持98%的β-葡萄糖苷酶活性。其结果初步验证了对上述两个酶蛋白的活性中心的预测,为进一步揭示7-木糖紫杉烷糖基水解酶结构与功能的关系提供了实验依据。
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| 关 键 词： | 香菇 β-木糖苷酶/β-葡萄糖苷酶 酶活性中心预测 定点突变 酶活性分析 |
Prediction and preliminary functional analysis of the potential active center of the glycoside hydrolases LXYL-P1-1 and LXYL-P1-2 |
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| Authors: | WANG Fen and ZHU Ping |
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| Institution: | State Key Laboratory of Bioactive Substance and Function of Natural Medicines & Ministry of Health Key Laboratory of Biosynthesis of Natural Products, Institute of Materia Medica, Peking Union Medical College & Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100050, China;State Key Laboratory of Bioactive Substance and Function of Natural Medicines & Ministry of Health Key Laboratory of Biosynthesis of Natural Products, Institute of Materia Medica, Peking Union Medical College & Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100050, China |
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