| K5裂解酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质分析 |
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| 引用本文： | 高金卉,窦文芳,李会,张晓梅,许泓瑜,许正宏. K5裂解酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质分析[J]. 生物工程学报, 2012, 28(6): 696-704 |
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| 作者姓名： | 高金卉 窦文芳 李会 张晓梅 许泓瑜 许正宏 |
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| 作者单位： | 江南大学医药学院制药工程研究室，江苏 无锡 214122;江南大学医药学院制药工程研究室，江苏 无锡 214122;江南大学医药学院制药工程研究室，江苏 无锡 214122;江南大学医药学院制药工程研究室，江苏 无锡 214122;江南大学医药学院制药工程研究室，江苏 无锡 214122;江南大学医药学院制药工程研究室，江苏 无锡 214122；江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 中央高校基本科研业务费专项资金 (No. JUSRP111A50) 资助。 |
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| 摘 要： | K5多糖裂解酶(Elma)能够裂解半合成肝素的底物-K5多糖,裂解产物是半合成法生产低分子量肝素的底物。利用PCR方法扩增elma,构建表达载体pET-28a-Elma,将构建好的质粒转化至大肠杆菌BL21中,以0.2 mmol/L的IPTG在16℃诱导5 h实现了高效表达,SDS-PAGE分析表明Elma表达量可达菌体总蛋白的30%以上。采用Ni2+-NTA亲和层析法和G-75分子筛层析纯化目的蛋白,其纯度大于95%。通过PAGE多糖电泳发现裂解前后的K5多糖分子量有明显的减小。根据Elma裂解产物产生双键从而在232 nm处有吸光度的变化来测Elma的酶活。其最适反应温度为37℃,反应的最适pH值为7.0。底物特异性分析发现Elma除K5多糖外对肝素和透明质酸也有降解作用。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 K5多糖 K5裂解酶 表达 纯化 |
| 收稿时间： | 2011-11-09 |
Expression, purification and characterization of K5 lyase in Escherichia coli |
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| Jinhui Gao,Wenfang Dou,Hui Li,Xiaomei Zhang,Hongyu Xu and Zhenghong Xu. Expression, purification and characterization of K5 lyase in Escherichia coli[J]. Chinese journal of biotechnology, 2012, 28(6): 696-704 |
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| Authors: | Jinhui Gao Wenfang Dou Hui Li Xiaomei Zhang Hongyu Xu Zhenghong Xu |
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| Affiliation: | Laboratory of Pharmaceutical Engineering, School of Medicine and Pharmaceutics, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;Laboratory of Pharmaceutical Engineering, School of Medicine and Pharmaceutics, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;Laboratory of Pharmaceutical Engineering, School of Medicine and Pharmaceutics, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;Laboratory of Pharmaceutical Engineering, School of Medicine and Pharmaceutics, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;Laboratory of Pharmaceutical Engineering, School of Medicine and Pharmaceutics, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China;Laboratory of Pharmaceutical Engineering, School of Medicine and Pharmaceutics, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China; The Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Escherichia coli K5 polysaccharide K5 lyase expression purification |
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