建立高效液相色谱-串联质谱检测细胞内腺苷酸浓度的方法及其应用

细胞内腺苷酸浓度变化是细胞能量代谢改变的感应器，建立高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内腺苷酸浓度的方法有助于监测药物对细胞能量代谢的影响．用含有Na-EDTA的高氯酸溶液超声裂解细胞．采用超高效HSS T3色谱柱 (2.1 mm ×100 mm, 1.8 μm)，以8 mmol/L N, N-二甲基己胺(DMHA)水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱，采用正离子模式质谱检测，在多反应监测(MRM)模式下进行定性定量分析．结果表明，AMP、ADP和ATP分别在(0.1814～14.5164) μmol/L、(0.2342～18.7354) μmol/L和(0.2003～16.0260) μmol/L线性范围内具有良好的线性关系，其相关系数分别为0.9984、0.9964和0.9990．AMP、ADP和ATP的检出限(LOD，S/N>3)分别为1.9291、1.8794 和166.5 nmol/L，定量限(LOQ，S/N>10)为1.9632、1.9672和185.6 nmol/L，且加标回收率为81.8% ～107.8%，相对标准偏差小于7.55%．AMP、ADP和ATP的日内偏差(RSD)分别为6.16%、5.13%和7.66%，日间偏差(RSD)分别为6.36%、2.74%和6.77%．该方法快速、简单、灵敏，能满足细胞内AMP、ADP和ATP含量的检测要求．通过检测分析在不同浓度高良姜挥发油作用下人肺癌A549细胞内AMP、ADP和ATP含量变化，结果显示细胞总的腺苷酸水平和能荷呈浓度依赖性下降，且当浓度达到500 mg/L时ATP/TAN明显下降，而A549细胞中AMP/ATP比例水平呈浓度依赖性增加．这提示高良姜挥发油可通过影响细胞能量代谢抑制细胞增殖．

Establishment of High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Intracellular Adenosines Analysis and Its Applications