| 云南红梨PyMT基因的克隆、原核表达和功能分析 |
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| 引用本文： | 樊磊,张晓东,陈丽梅,苏俊,舒群,李昆志. 云南红梨PyMT基因的克隆、原核表达和功能分析[J]. 生命科学研究, 2011, 15(6): 485-492 |
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| 作者姓名： | 樊磊 张晓东 陈丽梅 苏俊 舒群 李昆志 |
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| 作者单位： | 1. 昆明理工大学生物工程技术研究中心,中国云南昆明,650500
2. 云南省农业科学院园艺科学研究所,中国云南昆明,650205 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31060258) |
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| 摘 要： | 金属硫蛋白(metallothioneins,MTs)是一种在生物中普遍存在的多功能蛋白.根据云红梨1号光特异性差减文库中获得的PyMT(Pyrus pyrifolia metallothionein)基因序列,PCR扩增4种红梨PyMT的基因组序列并进行序列分析;通过RT-PCR方法从云红梨1号果皮中扩增出PyMT基因,并将其命名为PyMT1(Pyrus pyrifo-lia metallothionein 1).构建原核表达载体pGEX-4T-1-PyMT1,在E.coli BL21中进行表达;通过在液体培养基中添加不同浓度的重金属离子,检测转化菌和对照菌的的生长曲线,分析PyMT1的功能.序列分析表明,PyMT1是典型的Metallothion 2.PyMT1氨基酸序列系统发育分析表明,PyMT1与MdMT亲缘关系最近.SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期的大小一致;生长曲线结果表明工程菌对重金属离子Zn、Cu、Cd具有一定的耐受性.这些结果为进一步纯化、鉴定目的蛋白和研究其结构和功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 云南红梨 PyMT 序列分析 原核表达 重金属抗性 |
Cloning,Prokaryotic Expression and Function Analysis of PyMT Gene from Yunnan Red Pear(Pyrus pyrifolia) |
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| FAN Lei , ZHANG Xiao-dong , CHEN Li-mei , SU Jun , SHU Qun , LI Kun-zhi. Cloning,Prokaryotic Expression and Function Analysis of PyMT Gene from Yunnan Red Pear(Pyrus pyrifolia)[J]. Life Science Research, 2011, 15(6): 485-492 |
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| Authors: | FAN Lei ZHANG Xiao-dong CHEN Li-mei SU Jun SHU Qun LI Kun-zhi |
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| Affiliation: | FAN Lei1,ZHANG Xiao-dong1,CHEN Li-mei1,SU Jun2,SHU Qun2*,LI Kun-zhi1*(1.Biotechnology Research Centre,Kunming University of Science and Technology,Kunming 650500,Yunnan,China,2.Institute of Horticulture,Yunnan Academy of Agricultural Sciences,Kunming 650205,China) |
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| Abstract: | Metallothionein is a kind of ubiquitous and multifunctional protein in organism.PyMT(Pyrus pyrifolia metallothionein) genomic sequences were amplified according to the EST sequence of the red pear 'Yunhong-1's light-specific supression substration hybridization library from four cultivars of Yunan red pear and these sequences were analyzed.The PyMT cDNA sequence of 'Yunhong-1' was amplified by RT-PCR and was designated PyMT1(Pyrus pyrifolia metallothionein 1).Prokaryotic expression vector pGEX-4T-1-PyMT1 wa... |
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| Keywords: | Yunnan red pear PyMT sequence analysis prokaryotic expression heavy mental resistance |
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