| GOLPH2的原核表达、纯化、抗体制备和初步应用 |
| |
| 引用本文： | 李峰,刘艳红,谢平丽,李跃辉,李官成.GOLPH2的原核表达、纯化、抗体制备和初步应用[J].生命科学研究,2011,15(5):438-442. |
| |
| 作者姓名： | 李峰 刘艳红 谢平丽 李跃辉 李官成 |
| |
| 作者单位： | 中南大学肿瘤研究所,癌变与侵袭原理教育部重点实验室,卫生部癌变原理重点实验室,中国 湖南长沙 410078 |
| |
| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划)资助项目(2010CB833605) |
| |
| 摘 要： | 目前发现GOLPH2蛋白与肝癌密切相关,将golph2基因进行克隆、表达并制备多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.应用RT-PCR技术,从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增得到golph2 cDNA,将其克隆到原核表达载体pET21a(+)-TRX内、转化大肠杆菌DH5a,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.His-tag磁珠纯化试剂盒纯化重组蛋白GOLPH2,SDS-PAGE鉴定.将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA、Western blot方法检测抗体的灵敏度和特异性,并测定临床血清标本中GOLPH2蛋白水平.成功地构建了表达TRX-GOLPH2融合蛋白的原核表达质粒pET21a(+)-TRX-GOLPH2.并在大肠杆菌BL21(DE3)内得以高效表达,且以可溶性的形式存在.SDS-PAGE和Western blot证实,重组GOLPH2蛋白质与预期结果一致.抗血清能够特异地识别52 kD重组蛋白、73 kD细胞裂解液和血清蛋白质.成功制备了GOLPH2蛋白质和多克隆抗体,能用于后续研究.
|
| 关 键 词： | 肝细胞癌 蛋白质表达 GOLPH2 多克隆抗体 |
Expression,Purification,Antibody Preparation and Preliminary Application of Tumor Protein GOLPH2 |
| |
| LI Feng,LIU Yan-hong,XIE Ping-li,LI Yue-hui,LI Guan-cheng.Expression,Purification,Antibody Preparation and Preliminary Application of Tumor Protein GOLPH2[J].Life Science Research,2011,15(5):438-442. |
| |
| Authors: | LI Feng LIU Yan-hong XIE Ping-li LI Yue-hui LI Guan-cheng |
| |
| Institution: | LI Feng,LIU Yan-hong,XIE Ping-li,LI Yue-hui,LI Guan-cheng(Cancer Research Institute,Central South University,Key Laboratory of Carcinogenesis and Cancer Invasion,Ministry of Education,Key Laboratory of Carcinogenesis,Ministry of Health,Changsha 410078,Hunan,China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | hepatocellular carcinoma expression of protein GOLPH2 polyclonal antibody |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
