| 针对核因子-kB P65基因的短发夹干扰RNA逆转录病毒载体构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 吴春婷,赵佳晖,闫树凤,靳丽妍,朱光发.针对核因子-kB P65基因的短发夹干扰RNA逆转录病毒载体构建与鉴定[J].现代生物医学进展,2009,9(8). |
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| 作者姓名： | 吴春婷 赵佳晖 闫树凤 靳丽妍 朱光发 |
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| 作者单位： | 1. 首都医科大学附属北京安贞医院呼吸科,北京,100029
2. 首都医科大学附属北京安贞医院泌尿外科,北京,100029 |
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| 基金项目： | 北京市教委面上项目,教育部留学回国人员科研启动基金 |
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| 摘 要： | 目的:构建针对人核因子kB亚基P65基因mRNA的短发夹干扰RNA(shRNA)逆转录病毒表达载体,并探讨小干扰RNA(siRNA)靶向抑制NF-kB P65基因表达的作用.方法:根据shRNA设计原则,在人NF-kB P65全长序列中选取合19个核苷酸靶序列,设计形成siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pSUPER.retro.neo中,构建针对NF-kB P65基因的shRNA表达载体.经293A细胞包装,并感染NIH3T3细胞进行病毒滴度测定后,感染THP-1细胞.分别采用RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白水平检测干扰效果.结果:限制性酶切和基因测序证实针对人NF-kB P65亚基的shRNA表达逆转录病毒载体成功构建;其感染THP-1细胞后,NF-kB P65的mRNA和蛋白表达明显抑制.结论:成功构建了NF-kB P65 shRNA逆转录病毒表达载体,该载体能高效感染THP-1并明显抑制NF-kB P65的表达.
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| 关 键 词： | RNA干扰 短发夹RNA 逆转录病毒 核因子-kB |
Construction and identification of human Nuclear factor kappa B P65 siRNA retrovirus expression vector in vitro |
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| WU Chun-ting,ZHAO Jia-hui,YAN Shu-feng,JIN Li-yan,ZHU Guang-fa.Construction and identification of human Nuclear factor kappa B P65 siRNA retrovirus expression vector in vitro[J].Progress in Modern Biomedicine,2009,9(8). |
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| Authors: | WU Chun-ting ZHAO Jia-hui YAN Shu-feng JIN Li-yan ZHU Guang-fa |
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