| 新型甲氧苄啶耐药二氢叶酸还原酶DfrB7的生化分析与宿主菌耐药机制研究 |
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| 引用本文： | 李玲,王明钰,徐海.新型甲氧苄啶耐药二氢叶酸还原酶DfrB7的生化分析与宿主菌耐药机制研究[J].微生物学报,2021,61(12):4097-4105. |
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| 作者姓名： | 李玲 王明钰 徐海 |
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| 作者单位： | 山东大学微生物技术研究院, 微生物技术国家重点实验室, 山东 青岛 266237 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31770042， 31770043)，山东省重点研发计划(2020CXGC011305) |
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| 摘 要： | 目的] 分析新型甲氧苄啶获得性耐药蛋白DfrB7的生化性质，探究其与B家族代表性的二氢叶酸还原酶（DHFR）对甲氧苄啶获得性耐药的生化基础。方法] 构建系统进化树分析B家族DHFRs与新型DfrB7的进化关系。将dfr基因分别构建到pACYC184和pET15b（+）载体并转化到相应大肠杆菌中。使用微量肉汤稀释法确定克隆菌株对甲氧苄啶的耐药性。测定DHFRs使用NADPH作为质子供体催化二氢叶酸还原的酶活反应参数。通过等温滴定量热法测定甲氧苄啶的解离常数。结果] 克隆到大肠杆菌中的新型dfrB7基因表现出对甲氧苄啶的高耐药表型。系统进化树确定了dfrB7编码B家族的DHFRs。检测并比较DfrB7和代表性DHFRs的酶活性质、抑制剂的亲和力，与染色体上DHFR相比，DfrB7与DfrB1均表现出显著降低的催化活性，通过生化实验证实B家族二氢叶酸还原酶对甲氧苄啶结合力极差。结论] 新型dfrB7基因编码的DfrB7具有B家族二氢叶酸还原酶的普遍特征。B家族二氢叶酸还原酶赋予宿主菌对甲氧苄啶的获得性耐药与该酶对甲氧苄啶的低亲和力有关。
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| 关 键 词： | 二氢叶酸还原酶 甲氧苄啶耐药性 生化分析 |
| 收稿时间： | 2021/3/22 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2021/6/22 0:00:00 |
Characterization and biochemistry analysis of a novel trimethoprim resistant DfrB7 and the mechanism of trimethoprim resistance |
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| Ling Li,Mingyu Wang,Hai Xu.Characterization and biochemistry analysis of a novel trimethoprim resistant DfrB7 and the mechanism of trimethoprim resistance[J].Acta Microbiologica Sinica,2021,61(12):4097-4105. |
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| Authors: | Ling Li Mingyu Wang Hai Xu |
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| Institution: | State Key Laboratory of Microbial Technology, Microbial Technology Institute, Shandong University, Qingdao 266237, Shandong Province, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | dihydrofolate reductase trimethoprim resistance biochemistry analysis |
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