山羊β-casein位点打靶载体在乳腺上皮细胞中的表达研究

以本地山羊基因组DNA为模板,通过长链PCR扩增出山羊β-casein上游包括启动子，外显子1及部分外显子2的6.1kb的调控序列及下游3.3kb的序列，将来自质粒pCDNA3的neo基因以及来自质粒pNEOZTK-2的tk基因，经克隆重组后构建了本地山羊乳腺特异性定点打靶载体，并在其中克隆人乳铁蛋白mini基因，采用脂质体法转染小鼠乳腺上皮癌化细胞系C127，以进行打靶载体的表达功能检测，双夹心ELISA测得诱导液中乳铁蛋白表达量为0.2μg/mL，Western-blot显示重组蛋白分子量比标准品略小，约为76kD，结果说明本载体能够指导外源基因在动物乳腺细胞内正确表达。