| 定点突变人α_(99)、β_(82)位的血红蛋白及在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 张浩,毛秉智,冯健男,王全立,冯起,董波.定点突变人α_(99)、β_(82)位的血红蛋白及在大肠杆菌中的表达[J].中国生物化学与分子生物学报,2000,16(3):330-334. |
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| 作者姓名： | 张浩 毛秉智 冯健男 王全立 冯起 董波 |
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| 作者单位： | 张浩（北京放射医学研究所,北京 100850）;毛秉智（北京放射医学研究所,北京 100850）;董波（北京放射医学研究所,北京 100850）;冯健男（北京基础医学研究所,北京 100850）;王全立（北京输血研究所,北京 100850）;冯起（北京输血研究所,北京 100850） |
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| 摘 要： | 模拟分析发现血红蛋白两条α珠蛋白链上 99位的 Lys突变为 Cys后 ,它们之间可以形成二硫键 ,两条β珠蛋白链上 82位的 Lys突变为 Cys后可以增加血红蛋白四聚体间氢键的作用 ,分别起到稳定四聚体的作用 .利用寡核苷酸介导的定点突变技术将α99、β82 位的 Lys突变为 Cys.将突变后的血红蛋白插入 p BV2 2 0载体 ,在大肠杆菌中获得了高效表达 ,其表达产物达细菌总蛋白的2 0 %左右 ,并经 Western印迹证实
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| 关 键 词： | 血红蛋白 大肠杆菌 定点突变 |
| 收稿时间： | 2000-06-20 |
| 修稿时间： | 1999年7月22日 |
Site-directed Mutagenesis of Human |
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| ZHANG Hao,MAO Bing zhi,FENG Jian nan ,WANG Quan li ,FENG Qi ,DONG Bo.Site-directed Mutagenesis of Human[J].Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology,2000,16(3):330-334. |
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| Authors: | ZHANG Hao MAO Bing zhi FENG Jian nan WANG Quan li FENG Qi DONG Bo |
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| Institution: | (Beijing Institute of Radiation Medicine,Beijing 100850,China; 1) Beijing Institute of Basic Medicine,Beijing 100850,China; 2) Beijing Ins |
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| Abstract: | In order to increase the stability of hemoglobin tetramer,with computer modeling predication two α 99 lysines of α globin mutated to cysteines can form a disulfide bond,and two β 82 lysines of β globin mutated to cysteines can form a strong hydrogen bond so that they can stabilize the hemoglobin tetramer.With site directed mutagenesis technique,α 99 and β 82 lysines were mutated to cysteines.Then mutant α and β genes were introduced into the expression vector pBV220 and exhibited a high expression level after induction.The expression product was as inclusion body and the yield reached about 20% of total bacterial protein.The products were confirmed by Western blotting. |
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| Keywords: | Hemoglobin Escherichia coli Site directed mutagenesis |
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