| 摘 要： | 目的建立快速鉴定B群链球菌(group B Streptococcus,GBS)的同时检测其对克林霉素、红霉素耐药基因的多重PCR方法,并初步应用。方法建立多重PCR方法,同时扩增以下4个基因位点:GBS编码CAMP因子的基因cfb、大环类脂类耐药基因erm B和mef A/E、克林霉素耐药基因lin B。对该方法的引物质量浓度、Taq酶量和退火温度进行优化,确定多重PCR最适反应体系及最低检测限;将该方法用于91株GBS临床菌株的鉴定及其耐药性的检测,并评价其与常规PCR方法结果的一致性。结果多重PCR的最适反应体系,总量25μL:多重PCR mix212.5μL、多重PCR mix1Taq酶0.23μL、lin B-F和lin B-R引物0.4μmol/L、mef A/E-F和mef A/E-R引物0.2μmol/L、erm B-F和erm B-R引物0.12μmol/L、cfb-F和cfb-R引物0.08μmol/L、DNA 10~100 ng、不足量补入无菌去离子水。扩增程序为:94℃预变性60 s;94℃变性30 s、53℃退火90 s、72℃延伸30 s,共30个循环;72℃延伸10 min。最低检测限为20 pg/μL。多重PCR方法与常规PCR方法检测91株GBS临床菌株,cfb基因结果一致率为100%,erm B、mef A/E和lin B基因的Kappa值分别为0.938、0.956和0.935。结论建立的以GBS cfb、erm B、mef A/E和lin B基因为检测位点的多重PCR方法,可在鉴定GBS的同时检测其对克林霉素、红霉素的耐药性。
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