| 昆虫细胞制备AAV-ITR基因表达微载体 |
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| 引用本文： | 李泰明,潘俊杰,祁静,张春. 昆虫细胞制备AAV-ITR基因表达微载体[J]. 生物工程学报, 2015, 31(8): 1230-1238 |
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| 作者姓名： | 李泰明 潘俊杰 祁静 张春 |
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| 作者单位： | 1 中国药科大学 生命科学与技术学院，江苏 南京 210009,1 中国药科大学 生命科学与技术学院，江苏 南京 210009,2 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 苏州市分子诊断和治疗技术重点实验室，江苏 苏州 215163,2 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 苏州市分子诊断和治疗技术重点实验室，江苏 苏州 215163 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 81371670)，江苏省研究生培养创新工程 (No. SJLX_0285) 资助。 |
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| 摘 要： | AAV-ITR基因表达微载体是只含有腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)倒置末端重复序列(Inverted terminal repeats,ITR)、基因表达顺式元件和目的基因,而不含有其他外源DNA序列的双链或单链DNA。本研究利用杆状病毒表达系统,制备得到两种重组杆状病毒Bac-ITR-EGFP和Bac-inrep,并将二者的P3代病毒共同感染昆虫细胞Spodoptera frugiperda(Sf9),抽提小分子量DNA,获得AAV-ITR-EGFP基因表达微载体,2×107的Sf9细胞抽提可以得到100μg AAV-ITR-EGFP基因表达微载体,核酸电泳显示AAV-ITR-EGFP基因表达微载体主要以单体和二聚体的形式存在。将AAV-ITR-EGFP基因表达微载体通过polyethylenimine(PEI)转染HEK 293T细胞,24 h后荧光显微镜观察有EGFP表达,48 h后达到高峰,转化效率达到65%。
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| 关 键 词： | 基因治疗，基因表达微载体，杆状病毒表达系统，非病毒载体 |
| 收稿时间： | 2014-09-16 |
Preparation of a novel AAV-ITR gene expression mini vector in Sf9 insect cells via baculovirus |
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| Taiming Li,Junjie Pan,Jing Qi and Chun Zhang. Preparation of a novel AAV-ITR gene expression mini vector in Sf9 insect cells via baculovirus[J]. Chinese journal of biotechnology, 2015, 31(8): 1230-1238 |
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| Authors: | Taiming Li Junjie Pan Jing Qi Chun Zhang |
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| Affiliation: | 1 School of Life Science and Technology, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, Jiangsu, China,1 School of Life Science and Technology, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, Jiangsu, China,2 Suzhou Institute of Biomedical Engineering and Technology, Chinese Academy of Sciences, Suzhou 215163, Jiangsu, China and 2 Suzhou Institute of Biomedical Engineering and Technology, Chinese Academy of Sciences, Suzhou 215163, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | gene therapy gene expression mini vector Bac-to-Bac baculovirus expression system non-viral vector |
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