| 逆转录病毒载体pOZ-KLF5的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 赵新宇,王薇茜,芦泽兰,黄雷,赵克温. 逆转录病毒载体pOZ-KLF5的构建及鉴定[J]. 生命科学研究, 2015, 0(2): 124-130 |
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| 作者姓名： | 赵新宇 王薇茜 芦泽兰 黄雷 赵克温 |
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| 作者单位： | 上海交通大学医学院病理生理学教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(81171888) |
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| 摘 要： | 为研究KLF5的相互作用蛋白从而深入探索其生物功能,构建了C端带有FLAG、HA、6x His三标签的p OZ-KLF5真核表达逆转录病毒载体。p OZ-KLF5载体可通过一次转录得到双顺反子转录单位,即一个转录物能表达两种独立存在的蛋白质:三标签融合蛋白KLF5-3x Tag和筛选标记——白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)。通过偶联IL-2Rα抗体的磁珠成功筛选出KLF5-3x Tag表达阳性的293T细胞,经Western-blot检测细胞内KLF5-3x Tag表达情况及其对293T细胞增殖及周期的影响,发现KLF5-3x Tag能够促进细胞克隆的形成并使S期细胞增多,且可被已知E3泛素连接酶WWP1降解,与已有报道一致。进一步通过免疫沉淀实验证明了与KLF5融合的标签的免疫反应性。该质粒的成功构建为研究KLF5相互作用蛋白及深入探索其生物功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | KLF5 双顺反子转录 真核表达 三标签融合蛋白 |
Construction and Characterizations of pOZ-KLF5 Retroviral Plasmid |
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| ZHAO Xin-yu;WANG Wei-xi;LU Ze-lan;HUANG Lei;ZHAO Ke-wen. Construction and Characterizations of pOZ-KLF5 Retroviral Plasmid[J]. Life Science Research, 2015, 0(2): 124-130 |
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| Authors: | ZHAO Xin-yu WANG Wei-xi LU Ze-lan HUANG Lei ZHAO Ke-wen |
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| Affiliation: | ZHAO Xin-yu;WANG Wei-xi;LU Ze-lan;HUANG Lei;ZHAO Ke-wen;Department of Pathophysiology, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine; |
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